Η μέθοδος PCR (αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης) είναι το "χρυσό πρότυπο" της σύγχρονης διάγνωσης DNA, μια εξαιρετικά ευαίσθητη μέθοδος μοριακής βιολογίας. Η μέθοδος PCR χρησιμοποιείται στην ιατρική, στη γενετική, στην εγκληματολογία και σε άλλους τομείς. Χρησιμοποιείται συχνά και με επιτυχία στη διάγνωση πολλών μολυσματικών ασθενειών.
Διάγνωση μολυσματικών ασθενειών με PCR
Η δοκιμή PCR επιτρέπει την ανίχνευση όχι μόνο του ίδιου του παθογόνου παράγοντα, αλλά ακόμη και ενός μόνο θραύσματος ξένου DNA στο υπό έρευνα υλικό. Το διερευνηθέν (βιολογικό) υλικό είναι: φλεβικό αίμα, επιθηλιακά κύτταρα και το μυστικό της γεννητικής οδού, το σπέρμα, το σάλιο, τα πτύελα και άλλα βιολογικά εκκρίματα. Το απαιτούμενο βιολογικό υλικό καθορίζεται από την υποτιθέμενη ασθένεια.
Η μέθοδος PCR στην εποχή μας, φυσικά, είναι ένα ισχυρό διαγνωστικό εργαλείο. Ίσως το μοναδικό μειονέκτημα της μελέτης είναι η υψηλή τιμή της.
Στον κατάλογο των ασθενειών, η παρουσία των οποίων μπορεί να προσδιοριστεί με τη μέθοδο PCR:
- ιική και βακτηριακή πνευμονία.
- φυματίωση;
- ιλαρά, ερυθρά, παρωτίτιδα,
- μολυσματική ηπατίτιδα όλων των μορφών ·
- σαλμονέλωση, διφθερίτιδα.
- Helicobacteriosis και ασθένειες που προκαλούνται από εντερικές λοιμώξεις.
- ΣΜΝ (σεξουαλικά μεταδιδόμενα νοσήματα): γονόρροια, χλαμύδια, ουρελαπλάσμωση, σύφιλη, AIDS, έρπης των γεννητικών οργάνων, γαρνιρερέλη και άλλα.
STI διαλογής χρησιμοποιώντας τη μέθοδο PCR
Σε αντίθεση με τις παραδοσιακές αναλύσεις, η τεχνική PCR επιτρέπει την ανίχνευση σεξουαλικά μεταδιδόμενων λοιμώξεων (STI), ακόμη και αν τα συμπτώματά τους απουσιάζουν εντελώς. Για τη συλλογή του βιολογικού υλικού, οι γυναίκες καθαρίζονται επιθηλιακά κύτταρα του τραχηλικού σωλήνα, οι άντρες - αποξέωση της ουρήθρας. Εάν είναι απαραίτητο, η μέθοδος PCR διεξάγει μελέτη φλεβικού αίματος.
Έτσι, μια δοκιμή STI χρησιμοποιώντας τη μέθοδο PCR καθιστά δυνατή την αναγνώριση:
- ο ιός ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας (HIV).
- ανοιχτό treponemus (αιτιολογικός παράγοντας της σύφιλης).
- Ο ιός του απλού έρπη και ο κυτταρομεγαλοϊός.
- ανθρώπινο ιό θηλώματος (HPV).
- χλαμύδια, τοξόπλασμα, μυκοπλάσματα, ουρεπλάσμα και άλλες σεξουαλικές λοιμώξεις.
Αν η ανάλυση PCR εκτελείται σωστά, αποκλείεται η πιθανότητα ψευδών θετικών αποτελεσμάτων. Ξεχωριστά, πρέπει να αναφερθεί ο ιός ανθρώπινου θηλώματος (HPV) και η σημασία της μεθόδου PCR για τη διάγνωσή του. Σε αντίθεση με το ογκοκυτταρικό επίχρισμα, η μέθοδος PCR μπορεί να καθορίσει έναν συγκεκριμένο τύπο HPV, ιδιαίτερα τους ογκογόνους τύπους 16 και 18, η παρουσία των οποίων απειλεί μια γυναίκα με τόσο σοβαρή και συχνά θανατηφόρα ασθένεια όπως ο καρκίνος του τραχήλου της μήτρας . Η έγκαιρη ανίχνευση των ογκογόνων τύπων του HPV με τη μέθοδο PCR παρέχει συχνά την ευκαιρία να αποτραπεί η ανάπτυξη καρκίνου του τραχήλου της μήτρας.
Ανοσοενζυμική ανάλυση (ELISA) και μέθοδος αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης (PCR): πληγές και μείγματα
Ποια διαγνωστική μέθοδος είναι καλύτερη: PCR ή ELISA; Η σωστή απάντηση στο ερώτημα αυτό δεν υπάρχει, διότι ουσιαστικά η διάγνωση με τη βοήθεια αυτών των δύο μελετών έχει διαφορετικούς σκοπούς. Και πιο συχνά οι μέθοδοι IFA και PTSR εφαρμόζονται σε ένα σύνθετο.
Η δοκιμή PCR είναι απαραίτητη για τον προσδιορισμό του συγκεκριμένου αιτιολογικού παράγοντα της μόλυνσης, μπορεί να ανιχνευθεί αμέσως μετά τη μόλυνση, παρά την απουσία συμπτωματικής εκδήλωσης της νόσου. Αυτή η μέθοδος είναι ιδανική για την ανίχνευση κρυφών και χρόνιων βακτηριακών και ιογενών λοιμώξεων.
Σε αντίθεση με την τεχνική PCR, η μέθοδος ELISA έχει σχεδιαστεί για να μην ανιχνεύει τον αιτιολογικό παράγοντα της μόλυνσης, αλλά την ανοσολογική απόκριση του οργανισμού σε αυτό, δηλαδή την ανίχνευση της παρουσίας και της ποσότητας των αντισωμάτων σε ένα συγκεκριμένο παθογόνο. Ανάλογα με τον τύπο των αντισωμάτων που ανιχνεύονται (IgM, IgA, IgG), μπορεί να καθοριστεί το στάδιο ανάπτυξης της μολυσματικής διαδικασίας.
Και οι δύο μέθοδοι και η PCR, και η ELISA έχουν υψηλή αξιοπιστία (100 και 90%, αντίστοιχα). Αλλά είναι σημαντικό να σημειωθεί το γεγονός ότι η ανάλυση του ELISA σε ορισμένες περιπτώσεις δίνει ψευδώς θετική (αν ένα άτομο έχει αρρωστήσει με κάποια ασθένεια στο παρελθόν) ή ψευδώς αρνητικό (εάν η μόλυνση περάσει σχετικά πρόσφατα) αποτέλεσμα.